在临床肿瘤研究中，FFPE（福尔马林固定石蜡包埋）样本是数量最庞大、保存最完善的生物样本资源。PCF80作为基于PhenoCycler-Fusion（PCF）技术的空间单细胞蛋白组检测方案，以80个蛋白标志物覆盖免疫、肿瘤、基质、血管、代谢及细胞命运等多个维度，特别适用于人源FFPE组织样本，能够在保留组织完整结构的同时实现单细胞分辨率的多重蛋白成像。对于希望借助高重空间蛋白组学、组织原位空间蛋白组学技术或超多重蛋白成像技术深入探索复杂组织微环境的研究者而言，PCF80不仅兼容FFPE样本，还能帮助充分挖掘这些珍贵临床样本的研究价值，为空间多组学研究提供系统性的空间蛋白层面证据。
一、FFPE样本的独特价值与空间蛋白组检测需求
FFPE样本是临床病理诊断和回顾性研究中最常见的组织保存形式，具有数量庞大、临床信息完整、随访数据充分等显著优势。在肿瘤免疫微环境研究中，大量具有明确临床结局的FFPE样本蕴含着丰富的生物学信息，但传统免疫组化或免疫荧光技术通常只能检测少数几个蛋白指标，难以系统解析组织微环境中复杂的细胞组成和空间关系。
空间单细胞蛋白组技术的出现为FFPE样本的深度利用开辟了新路径。相比需要新鲜组织解离的技术，PCF空间单细胞蛋白组学采用DNA偶联抗体检测技术结合自动化高分辨荧光显微镜，所有DNA偶联抗体先一次性与组织切片结合，随后通过"杂交—成像—剥离"循环读取荧光信号。这一技术特点使其可用于FFPE样本的组织原位多重蛋白检测，无需对组织进行解离或破坏原有结构，从而在保留细胞原始空间位置的基础上实现高维蛋白指标的原位检测。
二、PCF80对FFPE样本的兼容性与检测能力
PCF80panel适用于人源FFPE组织样本，其80个蛋白标志物覆盖免疫、肿瘤、基质、血管、代谢和细胞命运等多个生物学模块。基于PCF空间单细胞蛋白组技术，研究者可在FFPE组织切片中进行多重蛋白原位成像，识别肿瘤细胞、免疫细胞、基质细胞和血管相关细胞等主要细胞类型，并进一步分析其功能状态和空间分布特征。
PCF空间单细胞蛋白组系统的成像区域最大可达18 mm × 35 mm，适合用于全切片或多个感兴趣区域的空间分析。对于FFPE样本而言，这有助于在保留组织结构的基础上获取更广泛区域的细胞组成、功能状态和空间互作信息。
三、FFPE样本在空间多组学整合中的应用潜力
在空间多组学研究中，FFPE样本兼容性尤为重要。PCF空间蛋白组数据可与空间转录组、常规病理图像等数据进行整合分析，用于从蛋白功能状态和基因表达调控两个层面理解组织微环境。
在特定研究流程中，PCF可与Visium、Xenium、GeoMX DSP等空间转录组平台形成互补。PCF获得的单细胞分辨率蛋白数据，可作为空间转录组细胞注释、ROI选择和反卷积结果验证的重要参考，从而帮助研究者构建更完整的空间多组学证据链。
四、FFPE样本评估要点与项目设计建议
尽管PCF80兼容FFPE样本，但样本的具体适用性仍需结合多个因素综合评估。样本保存时间、固定条件、切片质量、目标检测指标和研究目的都是影响检测效果的重要变量。保存时间较长的FFPE样本可能存在抗原修复效率下降的问题，而固定条件不当则可能影响组织形态和蛋白抗原性。切片厚度和质量同样会影响抗体渗透和成像效果。
因此，在启动项目前，建议研究者提供样本类型、保存时间、切片情况和具体研究目的等信息，以便进行技术可行性评估。对于回顾性队列研究，具有明确临床随访信息和治疗记录的FFPE样本尤为珍贵，PCF80可帮助从这些样本中提取细胞类型组成、功能状态、空间邻域关系和细胞互作网络等多层次信息，为疾病机制研究和生物标志物发现提供空间蛋白层面的证据。
五、FFPE样本在肿瘤微环境研究中的典型应用场景
FFPE样本在肿瘤免疫微环境研究中具有广泛的应用场景。在免疫治疗响应研究中，具有治疗前后配对样本或明确响应/非响应分组的FFPE样本，可用于探索治疗响应相关的空间生态位特征和细胞互作模式。在疾病进展分层研究中，具有不同预后结局的FFPE样本队列，可用于筛选与预后相关的空间生物标志物。在单细胞测序验证研究中，FFPE样本可用于对测序发现的新细胞亚群进行蛋白水平的原位验证。
已有空间单细胞蛋白组研究已在多种肿瘤FFPE样本中用于解析免疫细胞空间分布、细胞邻域类型、代谢微环境特征与治疗响应之间的关系。这些研究表明，PCF80适合用于从FFPE样本中系统提取空间蛋白组学信息，帮助回答"细胞是谁、位于哪里、处于什么状态、与谁相邻"等核心问题，为临床样本的科研价值转化提供技术支持。
PCF80空间单细胞蛋白组技术以其对FFPE样本的兼容性、80个蛋白标志物的高维检测能力和单细胞分辨率的空间成像优势，为临床珍贵FFPE样本的深度利用提供了可靠的技术平台。无论是回顾性队列研究、治疗响应分析，还是空间多组学整合探索，PCF80都可帮助研究者充分释放FFPE样本的科研价值，从空间蛋白层面揭示复杂组织微环境的生物学规律。
