质粒包装病毒伯远生物质粒包装病毒-平芜编程栈

质粒包装病毒伯远生物质粒包装病毒

伯远生物是国家级专精特新小巨人企业，国家级重点实验室，牵头多项省部级重大专项，公司科研技术人员500+（硕博占比40%以上），作为功能基因研究综合性平台，15年技术沉淀，每年完成功能基因研究数量50000+，长期服务课题组10000+（含协和、同济、华西、湘雅、中山、军事医学院等顶尖医学研究机构），各类仪器设备投资超1个亿

案例展示

案例展示

1、慢病毒感染细胞效率实例

图慢病毒感染细胞效率

2、慢病毒体内表达应用实例

图慢病毒体内表达应用实例（Shi Y, et al. 2017）。

参考文献

Mátrai J, Chuah MK, VandenDriessche T. Recent advances in lentiviral vector development and applications.Mol Ther. 2010;18(3):477-490.

Shi Y, Ping YF, Zhou W, et al. Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.Nat Commun.2017;8:15080.

我司默认采用三质粒系统进行包毒，若为过表达慢病毒包装，则需目的基因在3000bp以内，如有个性化要求，请致电详联

背景说明

背景说明

通常，LVs是通过反式互补产生的，其表达系统由用于表达特定基因的目的质粒及病毒gag/pol、Rev和VSVG等组分的包装质粒组成，其中包装质粒提供了病毒基因组mRNA包装成完整毒粒所必需的结构蛋白、聚合酶和包膜蛋白。

LVs具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，区别于一般的逆转录病毒载体，其对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。

通常根据不同的实验目的针对LVs改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、基因沉默等研究。外源基因则通过载体中的多克隆位点插入LVs以进行表达。

图反式互补生产LVs（Mátrai et al. 2010）。

原理简介

携带有外源基因的LVs在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。

LVs包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录，并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。

图慢病毒包装和侵染过程示意图

我司载体简介

我司可提供丰富的LVs产品体系，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、miRNA、circRNA。

我司原始细胞慢病毒包装载体列表，可根据不同的需求，选择不同的载体，插入不同的位置

服务流程

服务流程

客户在线下单——订单/实验材料确认——构建LVs包装载体与目的载体——共转染293T细胞——病毒上清收集——病毒浓缩和纯化——慢病毒鉴定（包括病毒滴度、质粒残留、宿主DNA残留、BSA残留、支原体检测、衣原体检测、内毒素检测、细菌及真菌检测等）——可选后续感染目的细胞及相关实验

我司默认采用三质粒系统进行包毒，若为过表达慢病毒包装，则需目的基因在3000bp以内，如有个性化要求，请致电详联

服务内容及说明

服务内容及说明

慢病毒滴度鉴定方法

检测项目	原理	优点	缺点
GEP荧光计数	流式细胞计数	经典方法，重复性好；检测活性病毒感染滴度	仪器和操作要求高；操作复杂
绝对定量qPCR	病毒感染工具细胞后，抽提整合目的片段的细胞基因组DNA，与标准品比较	检测活性病毒感染滴度；最接近真实滴度	仪器和操作要求高；操作复杂
RT-qPCR	病毒梯度稀释感染工具细胞后，抽提RNA，RT-qPCR检测病毒基因组表达	检测活性病毒感染滴度	受限于病毒感染后检测基因表达丰度
p24核心蛋白ELISA定量	对慢病毒颗粒稳定表达的p24蛋白进行ELISA检测	简单、快捷、重复性好	反映的是病毒物理颗粒数不是活性滴度