一、NK细胞在肿瘤免疫治疗中的前沿地位
自然杀伤细胞最近处于许多免疫治疗策略的前沿，人们正在开发一些新方法来充分利用NK细胞的抗肿瘤潜力。NK细胞在肿瘤免疫中起关键作用，目前逐渐成为免疫治疗策略的前沿领域。许多新化合物包括单克隆抗体正在开发中，以充分发挥其抗肿瘤潜力。此外，NK细胞的过继疗法包括异基因NK细胞和CAR-NK细胞，这些基于NK细胞的策略已经取得了一些成功。CAR-NK细胞比CAR-T细胞有几个明显优势，CAR-NK细胞的寿命很短，几乎不会产生靶外效应。另外，NK细胞产生的细胞因子种类与T淋巴细胞产生的细胞因子种类有很大不同，活跃的NK细胞通常产生IFN-γ和GM-CSF，不会产生CAR-T细胞通常诱导的细胞因子风暴。FITC标记的NKG2D/CD314 Fc嵌合蛋白可用于定量检测NKG2D蛋白的表达水平和配体结合活性，为NK细胞功能研究提供技术工具。
二、NKG2D受体及其配体的分子特征
最相关的NK细胞激活受体之一是NKG2D，其识别8种不同的NKG2D配体，包括MICA和MICB。MICA和MICB在正常细胞上低表达，但在受损、转化或感染的细胞表面表达上调，它们与NKG2D的结合触发NK细胞效应器功能。此外，MICA和MICB是多态性的，这种多态性通过调节其细胞表面表达、细胞内运输、免疫抑制的可溶性形式的脱落或NKG2D相互作用的亲和力来影响功能反应。在人类中，已经描述了8种不同的NKG2DL。MICA在多种肿瘤中均有表达，RNA测序数据表明，MICA在肺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌和乳腺癌中表达最高。FITC标记的NKG2D/CD314 Fc嵌合蛋白可用于研究NKG2D与配体的相互作用，为靶点验证提供定量数据支持。
三、肿瘤微环境中影响NK细胞功能的因素
NK细胞可以作为肿瘤炎症的驱动因素，导致肿瘤免疫细胞浸润，并促进"冷"肿瘤转化为"热"肿瘤，从而提高对免疫检查点抑制剂的反应性。NK细胞诱导有效肿瘤免疫的关键功能取决于与树突状细胞的成功串扰以及趋化因子CCL5和XCL1的产生，肿瘤源性前列腺素E2干扰这种相互刺激。TGF-β是NK细胞效应器功能的主要负调节因子，体外试验显示TGF-β和MMP产生的自分泌回路促进MICA和ULBP-2的脱落，并对肿瘤细胞表面上这些NKG2DL的表达产生负面影响。TGF-β还抑制NK细胞上NKp30和NKG2D的表达，并影响NK细胞代谢，导致糖酵解和氧化磷酸化减少，从而抑制NK细胞效应器功能。肿瘤相关巨噬细胞也是肿瘤免疫逃逸的参与者，靶向肿瘤相关巨噬细胞可以通过恢复NK细胞活化和效应器功能来改善肿瘤免疫。
四、靶向共抑制受体激活NK细胞的策略
抑制性受体构成的免疫检查点以PD-1/PD-L1轴为代表，已成为最前沿的研究热点，它们也通常在功能失调的NK细胞中过度表达。越来越多的证据表明NK细胞也表达PD-1和PD-L1，并且以它们为靶点可以恢复抗肿瘤NK细胞的效应器功能。在几种胃肠道肿瘤患者的循环NK细胞和肿瘤浸润NK细胞中观察到PD-1阳性NK细胞频率增加，PD-1表达增强。TIGIT是一种共抑制受体，在耗竭的肿瘤浸润NK细胞和肿瘤浸润性T细胞上过度表达，阻断TIGIT可诱导NK细胞恢复活力。CD96是NK细胞上表达的另一种共抑制受体，通过与肿瘤细胞上表达的CD155结合限制NK细胞效应器功能。NKG2A是另一种与CD94相关的抑制性受体，用抗NKG2A单抗阻断NKG2A，通过促进NK细胞和CTL细胞效应器功能，与抗PD-L1的ICI联合应用增强肿瘤免疫。
五、靶向NKG2D/NKG2DL轴的免疫治疗策略
MICA是肿瘤中广泛表达的NKG2DL，其作为免疫肿瘤学策略的靶点具有应用前景。ADCC是NK细胞介导的主要效应器功能之一，利用NK细胞介导的ADCC作用开发靶向MICA的单克隆抗体是主要策略之一。一些抗MIC的单克隆抗体也显示出有希望的临床前结果，靶向可溶性MICA的单克隆抗体单独或与抗CTLA-4单克隆抗体联合应用显示出治疗效果。其他针对α3结构域的抗MICA/B单克隆抗体抑制了蛋白水解脱落，抑制MICA和MICB脱落，延缓了小鼠黑色素瘤和结肠癌的生长。利用CAR-T或CAR-NK也可以靶向NKG2DL，已开发出一些经工程设计表达NKG2D的CAR-T细胞，对细胞系和异种移植的人或同基因小鼠肿瘤细胞系具有增强的效应器功能。FITC标记的NKG2D/CD314 Fc嵌合蛋白可用于评估CAR-T细胞与NKG2D配体的结合能力，验证其功能活性。
